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    常見問題

    超微量分光光度計主要運用在哪幾個方面?

    更新日期:2018年4月11日 大字 小字
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      超微量分光光度計本身就是一類很重要的分析儀器,無論是物理學、化學、生物學、醫學、材料學、環境學等科學研究領域。超微量分光光度計不僅涵蓋了可見光分光光度計的功能而且也可以進行紫外分光光度計的應用,最常用以下幾方面:

    超微量分光光度計

      1.核酸的定量
      核酸的定量是超微量分光光度計使用頻率最高的功能??梢远咳苡诰彌_液的寡核苷酸,單鏈DNA、雙鏈DNA,以及RNA。核酸的最高吸收峰的吸收波長260nm。每種核酸的分子構成不一,因此其換算系數不同。定量不同類型的核酸,事先要選擇對應消光因子。如:1OD的吸光值分別相當于50μg/ml的dsDNA,37μg/ml的ssDNA,40μg/ml的RNA,30μg/ml的Olig。測試后的吸光值經過上述系數的換算,從而得出相應的樣品濃度。除了核酸濃度,分光光度計顯示幾個非常重要的比值表示樣品的純度,如A260/A280的比值,用于評估樣品的純度,因為蛋白的吸收峰是280nm。純凈的樣品,比值大于1.8(DNA)或者2.0(RNA)。如果比值低于1.8或者2.0,表示存在蛋白質或者酚類物質的影響。A230表示樣品中存在一些污染物,如碳水化合物,多肽,苯酚等,較純凈的核酸A260/A230的比值大于2.0。
      2.UV-VIS常規可見-紫外檢測
      全波長超微量分光光度計可以像普通的紫外-可見分光光度計一樣行使功能。如BIO-DL MicroDrop可以顯示從185到910nm的光波下樣品的吸光值。最多可以同時指定檢測40個波長下的吸光值并把數據顯示在報告中。
      3.蛋白質的直接定量(UV法)
      這種方法是在280nm波長,直接測試蛋白。蛋白質測定過程非常簡單,先測試空白液,然后直接測試蛋白質。蛋白質直接定量方法,適合測試較純凈、成分相對單一的蛋白質。紫外直接定量法相對于比色法來說,速度快,操作簡單;但是容易受到平行物質的干擾,如DNA的干擾;另外敏感度低,要求蛋白的濃度較高。
      4.比色法蛋白質定量
      蛋白質通常是多種蛋白質的化合物,比色法測定的基礎是蛋白質構成成分:氨基酸(如酪氨酸,絲氨酸)與外加的顯色基團或者染料反應,產生有色物質。有色物質的濃度與蛋白質反應的氨基酸數目直接相關,從而反應蛋白質濃度。
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